元素百科资讯频道:本文主要讲的是关于己糖激酶法的原理和己糖激酶法过程的内容。己糖激酶(hexokinase)是别构酶,专一性不强,受葡萄糖-6-磷酸和ADP的抑制,KM小, 亲和性强,可以针对多种六碳糖进行作用。
己糖激酶法原理
在己糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸内酯,同时使NADP还原成NADPH。
根据反应方程式,NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比,在波长340nm监测吸光度升高速率,计算血清中葡萄糖浓度。
己糖激酶法过程
酶馄合试剂的成分与浓度
根据试剂盒说明书复溶后,混合配制成酶试剂,置棕色瓶中放冰箱保存,约可稳定7天。
2.5mmol/L葡萄糖标准应用液
手工操作
1.速率法测定(以半自动分析仪为例)
(1)主要参数
(2)加样;37℃预温酶混合试剂1000μ1,加血清20μ1,立即吸入自动分析仪,监测吸光度升高速率(△A/min)。
(3)计算
2.终点法测定:取16mmXl00mm试管,按下表编号与操作。
以上各管充分混匀,在37℃水浴,准确放置10min,分光光度计波长340nm、比色杯光径10mm,用蒸馏水调零,分别读取各管吸光度(Au、Ac、As、AB)。
计 算
参考值
空腹血清葡萄糖为3.89—6.1lmmol/L(70一110mg/dl)。
以上就是关于己糖激酶法的原理和己糖激酶法过程的全部内容。
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