超滤管在生物、化学实验室以及体外诊断都领域应用广泛,主要应用于包括抗原、抗体、酶、核酸或微生物等生物样品的浓缩,组织提取物或者细胞裂解液中大分子组分的纯化,超滤管还有对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩以及除盐、更换缓冲液或渗滤等。
其中,除盐、更换缓冲液或渗滤是去除含有生物分子的溶液汇总的盐分或溶剂的重要方法。可以在UFC910096 15mL装置中,通过浓缩样本,然后向浓缩液中加入任何所需溶剂复原至样本原始体积的方式,去除盐分或更换缓冲液。可重复“洗出”过程,直到污染微溶质的浓度充分降低为止。
使用超滤管时需注意:
1. 根据目的蛋白分子量和化学物质的耐受程度选择合适的超滤管。
超滤管一般有3kd、10kd、30kd、50kd、100kd等几种截留分子量,在选择时,要注意截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3。超滤管通常备有四种聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,不同的超滤膜对不同化学物质的耐受程度不同,需根据要求灵活选择。
需要强调的是,不同截留分子量的超滤管的应用领域不同,以常用的密理博Amicon®Ultra-15超滤管为例,10kd的超滤管用于体外诊断,可用来在分析之前浓缩血清、尿液以及其他体液,而30kd、50kd、100kd超滤管则主要用于生物、化学研究。
2. 新的超滤管使用前需进行预处理。
新买来的超滤是干燥的,且有些超滤膜中含有微量甘油,使用前需加入水量过膜的超纯水,并冰浴或冰箱里预冷几分钟,然后再将水倒出,加入蛋白液操作。另外,清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。
3. 超滤管离心操作时,要注意转速和加速度都不可太快,以免损坏超滤膜。
4. 超滤管都采用热风设计,使用时注意不可进行高压高温灭菌。
5. 如果要求去除引物,无论分子量大小为何,浓缩PCR产物时,都必须使用100kd离心管