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细胞培养耗材有哪些,需要哪些步骤
2017-08-15 09:40:38来源:元素商城

化学词典告诉你细胞培养耗材以及步骤。细胞培养泛指所有体外培养,其含义是指从动物活体体内取出组织,于模拟体内生理环境等特定的体内条件下,进行孵育培养,使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域,成为最重要的基础科学之一。

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细胞培养耗材

一、玻璃器材

培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶

二、塑料器材

多孔培养板、培养皿、培养瓶

三、橡皮器材

橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。

四、金属器材

剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头

五、其他物品

纱布、注射器和针头

细胞培养步骤

一、复苏

1.把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动(注意防止盖子不紧致使液体进入冻存管)。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。

3.把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。

4.标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到37℃的5%CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。

5.根据细胞增长速度2-3天换一次培养基。

二、传代

1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

2.把原有培养基吸掉。

3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。

4.细胞都变圆后加入等体积的含血清的培养基终止消化。

5.用移液枪吹打细胞,让细胞悬浮起来。

6.把细胞吸到10ml或15ml的离心管中,1000转离心5分钟。

7.倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。

8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。

三、冻存

把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。

冻存液的配制:70%的完全培养基+20

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