元素百科资讯频道:什么是生物素亲合素系统呢,生物素亲合素系统是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素亲合素系统可以与各种标记物结合,生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。下面就来看看生物素亲合素系统特点及应用。
生物素亲合素系统特点
高度特异性 生物素-亲合素系统的结合反应因其亲合力极高而呈现高度专一性,生物素、亲合素一旦结合则很难分离,这种高度特异、稳定地结合,使反应试剂可经得起高度稀 释,因而可明显降低或避免了反应中可能存在的非特异性作用。
高度灵敏性 亲合素可通过4个结合位点多价桥联生物素的反应物和标记物。另外,生物素化的大分子蛋白、核酸、酶等物质不仅保持其活性不受影响,更因生物素化形成许多" 触手"的多价制剂,使整个反应体系出现多级放大效应,因而赋予BAS极高的灵敏性。
3、简易、快速、安全、稳定、BAS的高度特异性及灵敏性,使其在反应体系应用中用量极微,故成本低廉。反应程序于数小时即完成,结果易观察。生物 素标记试剂可于4℃存放两年而效价不变。
4、应用广泛BAS可与多种标记系统如酶、荧光素、铁蛋白、凝集素、SPA、放射性核素等联合用于抗原、抗体、蛋白、激素、受体、核酸系统等多种生物学反应体系,也可作为亲合介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。近年 研究提出,生物素亲合素系统尚可作为均相酶免疫试验中高效的酶活性调变系统及新型的标记生物免疫传感器系统,因此,BAS有着极广的研究与应用潜力。
生物素亲合素系统应用
生物素与定位观察
亲和细胞化学是利用两种物质之间的高度亲和能力而相互结合的化学反应,广义上说,抗原抗体相互作用也是一种物质间的相互亲和。先令生物素衍生物(如结合了生物素的凝集素)与细胞表面的糖链结合,然后再用被亲和素标记的探针定位,这种方法更有利于微量抗原(或抗体)在细胞或亚细胞水平的定位。此外,在转染(blot technology)蛋白质,糖蛋白或者DNA过程中,使用生物素-亲和素系统介导染色比传统直接染色方法具有更高的灵敏度。
生物素与基因探针
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的,我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针,避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。
生物素与亲和层析
亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液, 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合,大大提高纯化蛋白质的纯度,或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上,再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物,然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱,这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上,最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业,当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时,可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素,然后用其获得目的DNA片段,再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
责任编辑:qxl
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