反相离子对色谱法是目前广泛应用的一种分析技术,是反相色谱中,在极性柳丁相中加入离子对试剂,使被分析的组分离子与离子对试剂的反离子生成不带电荷的中性离子,从而增加溶质与非极性固定相的作用,以改善分离效果的方法。
反相离子对色谱法无需衍生或使用特殊色谱柱,还具有反相色谱法操作简便和分离柱效高等固有优点,可以用于分离鉴定季铵盐类、胺类、氨基酚类、羟酸类等药物,同时也是氨基酸分析最常用的方法。
反相离子对色谱法在药物分析及测定方面的应用:
1. 反相离子对色谱法测定人血浆盐酸伪麻黄碱浓度,盐酸伪麻黄碱 ( PSE) 是麻黄碱的差向异构体, 临床所用的为盐酸右旋伪麻黄碱,是一种拟肾上腺素药, 能选择性收缩呼吸道毛细血管, 减轻鼻、咽部黏膜充血、膨胀, 用于治疗和减轻感冒所致的鼻塞、流涕、打喷嚏等症状。
2. 反相离子对色谱法还用于测定格列吡嗪片中5-甲基吡嗪-2-羧酸的含量,格列吡嗪主要应用于2型糖尿病患者的治疗,其作用机制为促胰岛β细胞分泌胰岛素。《中国药典》2015年版二部收载了格列吡嗪及其片剂,其有关物质项均只检查4-[2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基]苯磺酰胺(杂质Ⅰ)的含量,而可能存在的5-甲基吡嗪-2-羧酸既是格列吡嗪合成时使用的起始物料,又是格列吡嗪酰胺键断裂时产生的杂质,因此,监控5-甲基吡嗪-2-羧酸的含量对于格列吡嗪片的质量控制非常有必要。
除了药物分析作用外,反相离子对色谱法与MS/MS 技术联用以分析复杂样品中的氨基酸具有高灵敏度和高选择性,常用于痕量氨基酸的测定。反相离子对色谱法还用于测定不同茶叶中的茶氨酸:L-茶氨酸 ,属于酰胺类化合物( N-乙基-r-谷氨酰胺) ,极易溶于水,为茶叶中特有的一种非蛋白质氨基酸,其含量直接影响茶叶的品质,是茶叶中的主要呈味物质之一。同时,茶氨酸是茶叶中的主要活性成分之一,其药理学研究已经深入开展多年,主要集中在其抗焦虑和集中精神等作用。另一方面,茶氨酸对神经中枢系统具有保护作用,能够提高学习记忆和免疫能力,并减轻炎症反应等,这些作用已经得到研究的充分肯定。因此,无论是对茶叶的品质分析,还是以茶氨酸为主要的营养素补充剂或者功能食品进行研发,均需要对茶氨酸进行准确的定量分析。反相离子对色谱法具有精密度高、回收率良好、结果准确等特点,可以为茶叶类食品及保健食品的分析检测提供有效帮助。