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细胞总养不好,可能是你没注意这些培养基问题
2019-12-30 17:05:34来源:元素商城

实验室里流传这样一句话:“养细胞就像养孩子一样”。对很多父母而言,孩子成长过程中,但凡有个头疼脑热、小病小灾就担惊受怕许久,养细胞的实验党们也是同样的心境。不仅如此,养细胞过程中,还常常遇到“别人家的孩子”的情况。为什么别人家的细胞都成熟了,出息了,你家的细胞总是充满变数,不是半路夭折,就是发育不全呢?

影响细胞培养的因素有很多,实验室环境、温度、培养基、操作流程等,其中培养基是至关重要的一环。

首先培养基的选择要根据细胞的种类来定,比如天然培养基牛血清常作为动物细胞的体外培养,其中小牛血清和胎牛血清应用普遍;合成培养基中,RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞等的培养,Eagles MEM适用于细胞株的传代培养等。

其次,在培养基的选购和保存上也要格外注意。通常情况下,液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏使用前需提前从冰箱拿出,使其恢复至室温或者37度水浴。另外,因为培养基中的有些成分遇光辉产生过氧化氢,具有细胞毒性,如果长时间放置在室外或灯光下照射,会造成培养基质量的下降,所以培养基要保证避光保存。

需要强调的是,培养基中都含有大量的谷氨酰胺,用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但谷氨酰胺在溶液中不稳定,一般情况下,保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以不建议大批量购买或配置培养基。

再次,要注意培养基的PH值变化。细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4,偏高或偏低都不好,但相对于碱性条件而言,细胞更耐酸。原代细胞对PH值的变化很敏感,而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。细胞培养基可控制培养体系的pH值,为培养的细胞缓冲pH值的变化。这种缓冲作用通常是通过添加有机缓冲盐(例如:HEPES)或者二氧化碳-碳酸氢盐缓冲盐实现。

细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、细胞发生了污染等都可能引起培养基的PH值变化此外,如果较低温度保存,如-20冰箱保存,培养基经过冷冻再融化后颜色变深,也说明培养基有所变化(PH值升高

细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境,培养基的选择尤为重要,如果你有任何关于培养基选购的需要,可前往元素商城咨询。

相关链接:培养基

小牛血清胎牛血清

RPMI-1640HEPES

 

 


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