细胞培养，简单地说就是把来自机体的组织分散成为单个细胞，置于模拟体内条件的外部环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。随着生命科学研究的不断深入，细胞培养技术在整个生命技术产业发展中占据了关键地位。下面就细胞培养过程中可能会遇到的问题罗列出来，跟大家探讨下。

1. 如何选用细胞培养基？

答：细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养基中常常添加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。由于细胞种类和培养条件不同，细胞培养基的选择也不同，在动物细胞培养中最常用的培养基是合成细胞培养基，如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640等。由于天然培养基的一些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此一般需要在合成细胞培养基中添加5％～10％的血清。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，一般在开始进行细胞培养之前，上ATCC、中国科学院细胞库或者其他细胞库查清楚每一株细胞的培养条件是很有必要的，若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

2、何时须更换培养基？

答：视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

3、培养基中是否须添加抗生素？

答：除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

4、细胞培养中使用抗生素的注意事项

答：细胞培养时不应长期使用抗生素，因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。抗生素只能作为对付污染的最后手段短期使用，并尽快撤除。如果长期使用抗生素，则应同时进行无抗生素培养，以便作为鉴别隐性感染的对照。

5、细胞培养温度的设定

答：细胞培养的最佳温度主要取决于细胞供体的体温，此外也受到解刨部位体温差异的影响，例如：皮肤温度低于骨骼肌的温度。与温度过低相比，细胞培养时温度过高是更为严重的问题；因此，往往将培养箱的温度设定为略低于最佳温度。

6、各类细胞培养的最佳温度

答：大多数人和哺乳动物细胞系在36℃~37℃下具有最佳生长状态。

昆虫细胞在27℃具有最佳生长状态；在低于27℃以及27至30℃范围内，细胞生长较慢。

温度超过30℃时，昆虫细胞活力降低，即使温度降至27℃，细胞活力也无法恢复。

禽类细胞系在38.5℃时具有最佳生长状态。虽然此类细胞也可在37℃下培养，但其生长速度会变慢。

来源于冷血动物（例如：两栖动物、冷水鱼）的细胞系可耐受很宽的温度范围，为15-26℃。

请注意每种细胞的培养条件均有所不同，偏离某种细胞所需的培养条件会导致细胞表型异常，甚至培养完全失败。

因此，我们建议您应熟悉自己使用的细胞系，实验中严格遵守所有产品附带的操作说明。

7、为什么培养细胞要添加血清？

答：培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有：

(1) 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。

(2) 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

(3) 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

(4) 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤，对培养中的细胞起到某些保护作用。

细胞培养中血清的保存

答：细胞培养中所用的血清不尽相同，您需要根据您所培养的细胞种类和培养要求来挑选出最适合的血清。

我们建议将血清保存在-10至-20℃，若存放于4℃，请勿超过一个月。

若您无法一次用完一瓶，建议您将血清无菌分装至合适体积的灭菌容器内，再放回冷冻箱保存。

解冻血清时，建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱过夜融解，然后在室温下使之全融。需要注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。