细胞培养已经成为细胞和分子生物学研究的主要手段之一。目前在很多领域细胞培养正发挥着重要的作用。在进行以细胞为基础的试验和化验时,科研人员常常需要制造大量细胞以满足实验的需要。养细胞,已经成为了进实验室的必备技能之一。如果你至今都不会养细胞,那你就out了!
细胞培养的方法
细胞培养一般采用两种基本的培养方法,贴壁培养和悬浮培养。这两种方法主要的区分在于细胞在玻璃或经处理的塑料基质上的附着能力以及培养基中的悬浮状况。
贴壁培养通常在经组织培养处理或CellBIND®处理的培养皿、T培养瓶、滚瓶、CellSTACK®培养室或多孔培养板上进行培养,选择何种培养器皿主要依据所需细胞的数量、培养环境的状态、费用和个人习惯而定。
悬浮培养通常在以下培养器皿中进行培养:
1、依靠磁力搅拌器转动的悬浮细胞培养瓶或锥形瓶,能够有效保持培养基中细胞的悬浮活性
2、静态培养瓶如T培养瓶(扁平式)和普通培养瓶,其中的悬浮细胞没有持续搅动,也不会稳定地附着在培养基质上。
细胞培养条件
细胞培养首先要求培养环境无毒无菌,因为体外的细胞丧失了对抗微生物的防御力,所以一旦污染就会导致细胞死亡。细胞培养必须维持在恒定且适宜的温度。模拟体内环境嘛,那就是人体温多少,体外就模拟多少度,也就是36.5℃±0.5℃。一般来说,体外培养细胞所用的孵箱都是37℃恒温孵箱。
那为什么孵箱上还显示着5%二氧化碳呢?因为气体也是人体细胞培养生存的必须条件之一,主要就是氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环供给能量,二氧化碳用来维持培养基的PH值在7.2-7.4之间。再次,需要细胞培养基。培养基作为模拟体内环境所需的营养物质,一般包含碳水化合物,氨基酸,脂类,无机盐,维生素,微量元素和生长因子等。
细胞培养过程中的注意事项
进入培养间时,保持双手洁净。使用肥皂彻底清洗后,酒精干燥(不用纸巾)
•佩戴手套(保证手套可以被消毒)
•穿着带有松紧袖口的实验服
•不要随便触碰无关物品(例如:电话、门把手、甚至说是整理头发等)
•避免佩戴手表、戒指和其他首饰
•脱去在其他地方接触过动物的衣服
•患有感冒的人员需佩戴面罩