化学词典告诉你柱层析怎么装柱以及使用柱层析时需要注意的事项。柱层析技术(chromatography)又称柱色谱技术，主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。

柱层析怎么装柱

装柱方法分为湿法和干法，一般来说，湿法装柱的效果优于干法装柱。

1、湿法装柱：

先将柱层析的填料活化处理后浸润在适宜的有机溶剂中，使之处于有机环境。装柱时在层析柱自下而上依次填入硅烷花玻璃棉→石英砂→已处理好的层析填料，一边装柱一边用洗耳球轻轻敲打，使填料紧实，然后打开旋塞放掉多余的有机溶剂即可进行样品分析。

2、干法装柱：

现在层析柱内填入硅烷花玻璃棉，然后用不同极性的有机溶剂对层析柱的内壁进行充分润洗，待层析柱晾干，依次填入石英砂及各种层析填料，同样，一边装柱一边用洗耳球轻轻敲打，使填料紧实，然后加入一定量的有机溶剂淋洗填好的柱子，一般这个体积为柱子死体积的2倍。然后打开旋塞使淋洗液流出，即可进行样品分析。

填料紧实是保证层析柱柱效的关键，一定要注意。

层析柱最下层的棉花，我们一般是用硅烷花玻璃棉的，在马弗炉中活化即可用。如果用脱脂棉，需要用二氯甲烷抽提3遍以去除杂质，以防干扰实验。

柱层析注意事项

（1）、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同；

（2）、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。

（3）、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2－4倍，在此范围内越小越好。

（4）、选择合适的泵，首先是流速满足要求，脉冲尽量小。首选柱塞泵。

（5）、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0。45micrometre。

（6）、关于纯化，首先要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”与主要杂质分离；再用高选择性的层析去除绝大部分杂质；最后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。

（7）、至于测序，我想大概不到1mg应该足够了。