化学词典告诉你薄层色谱的操作步骤及注意事项。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。

薄层色谱操作步骤 

完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。

⑴制板

在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。

一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。

⑵点样

用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。

⑶展开

将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。

① 展开室应预饱和。为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。

② 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。

③ 薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。

④ 展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能没过样点。一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0.5cm。

⑤ 展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用。

⑥ 展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全，然后进行检视。

⑦ Rf值一般控制在0.3～0.8，当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。

⑷ 斑点的检出

展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。

展开分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂前沿至原点的距离的比值就是该化合物的Rf值。

薄层色谱的注意事项

(1)有些溶剂，如氯仿或乙醚，常掺入痕量乙醇作为保护剂，使用前应将其蒸馏除去，否则不能得到重复的色谱图。

(2)在不同的环境中保存的不同溶剂，水含量差别很大，特别是许多溶剂是亲水的，会受到环境湿度的影响，最好将其贮存在干燥器中。

(3)要防止溶剂在贮存过程中受到污染.其中有些会自动氧化，右些则因贮器密封不好，受到大气污染物的污染。污染程度与贮存条件及贮存时间有关。

(4)移动相和镕质相互作用会改变色谱行为，而溶剂中的杂质有时会参与这种相互作用。

(5)混合移动相中的各种溶剂也会相互作用。如果溶剂不纯或各批混合溶剂组成不同，混合物的性质就可能改变。

(6)混合溶剂在展开过程中可能发生分层现象，这种现象通常在弱溶剂和少量强溶剂混合时迟到。一段开始阶段优先吸附强溶剂，于是前沿就是100%的弱溶剂了。这种吸附剂被强溶剂饱和后，会出现由混合溶剂组成的策二个前沿。