化学词典告诉你层析柱仪器有哪些以及一般使用的方法。层析实验常用于分离纯化蛋白质、抗体等。层析柱是层析实验的主体,可根据所要分离的样品的大小、性质决定层析柱的直径尺寸和填充物。
层析柱仪器
1、梯度发生器:在进行校层析时,要用足够量的起始缓冲溶液淋洗,使末吸附的物质洗出,并使充分平衡,特别是用稀释法处理的样品更为必要。然后根据实验要求、再进行梯度洗脱或阶段洗脱。
2、微量泵:微量泵是一种可自动加液或抽液、加压或抽压的实验室常规设备。它是液相色谱中不可缺少的部件。它的基本原理很简单:由一可作无级调速的步进电机驱动一组滚轮,挤压—根硅橡胶管,使层析溶剂以恒定的流速通过层析柱,改变电机速度或采用不同内径的硅橡胶管,可使流速在适当范围内任意调节。
3、检测仪:在液相色谱中,最常用的检测器是紫外检测器,多用低压汞灯作光源,提供254nm单波长检测用,如再附加一根特制的石英磷光标作为波长转换器,则可成280nm检测器。
4、部分收集器:部分收集器可与层析柱、层析仪、检测器和电泳仪等分离分析仪器配套使用。自动地对所需液体进行各种方式的收集,从而省掉化学分析制备工作中大量繁琐的工作。
5、程序控制器:由于柱层析时间较长,需要有能在数分钟至数十小时内按时间或条件控制10个通路左右的程序控制器。利用这种程序控制器可按需要编排各种不同的工作程序,使它所控制的泵、阀、梯度发生器、检测器及收集器等协调地启动或终止工作。这样就可使仪器预热,柱体用甲乙两种溶液预洗,加样后梯度洗脱,洗脱液自动检测及收集,再用甲乙两种溶剂回收柱体,废洗涤液自动流入废液收集瓶,以及循环操作或工作完毕自动停机等工作程序准时地依次完成。它的作用相少于汁算机中的“中央处理机”,是十分重要的。
层析柱使用方法
柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。这两项技术掌握与否,对于提高实验的效率至关重要。常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀(没有填严实),使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花,导致分离效果不好。更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰当,结果导致几十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。分离同样的东西,熟手可能只需要半个小时,而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。由此可见,这两项技术掌握与否,对于提高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使用,从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。这里要指出的一点是:TLC的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。