元素百科资讯频道:本文主要探讨诺如病毒检测法:分子检测法。在分子检测技术中最为常用的是RT-PCR方法,也是目前最有效的诺如病毒检测方法,被称为诺如病毒检测的金标准,主要有RT-PCR 和巢式RT-PCR 等。
RT-PCR 方法具有应用性强、特异性好等特点。此类方法的引物序列是基于诺如病毒基因组保守序列设计的,常用保守区有RdRp、ORF1 3′端和ORF2的两端4个区域。
RT-PCR 的检测灵敏度较高且从样品处理到获得RT-PCR 结果一般需要约6h 即可完成。RT-PCR 产物一般为几百个碱基,对NVs 基因组完整性要求较低,对模板提取的技术性要求不高,降低了操作难度。
但是,由于诺如病毒基因的易变异性,不同毒株序列差别较大,目前还没有任何一对引物可以检出所有的诺瓦克病毒株。
VPg是诺如病毒基因组RNA 具有感染性的必要条件,所以该区具有相对的高保守性,可以参考该区核苷酸序列设计特异性引物用于诺如病毒的检测;还可以针对不同类NVs 设计不同的引物区别感染病毒的类属。
另外,制备高质量的RNA模板、RNA的易降解性和样品中含RT2PCR 抑制剂等是困扰该方法推广应用的难点。
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