元素百科资讯频道：本文是关于DTT作用的文章。

关键词：DTT；蛋白质；作用

DTT在蛋白纯化和保存中的作用

Cys存在与许多蛋白中，且其中的-SH常作为活性中心发挥作用，或者，两个-SH连接成二硫键，是维持蛋白质高级构象重要桥梁。-SH具有很强的还原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，从使蛋白失去活性。所以，在蛋白纯化和保存时，在溶液中加入一定量的DTT，以免蛋白-SH被氧化而失活。但这里就有一个矛盾，DTT该加多少量，以使-SH保持还原状态，而使二硫键免遭还原。

DTT对蛋白质的稳定作用

以摩尔数计算，5-10倍的量来保护-SH。如果蛋白保存buffer中含有15%左右的甘油，对蛋白具有很好的稳定作用。补充一点：如果DTT和蛋白摩尔比例比例增大到1：100，DTT就能破坏2硫键了，这时对应的浓度一般在10mM左右，这个一般在做还原肽图的时候用到。

DTT对部分分子二硫键空间位阻的作用

有些分子内的二硫键由于空间位阻的作用，还原剂的量增加到很大也不能破坏。这时可能要配合尿素等变性剂才能彻底打断二硫键(如包涵体变性)DTT在离子状态才有作用，在pH7-9.5的时候作用最强，pH降到3以下几无电离，因此可以通过降低pH至3以下来终止DTT作现在才知道DTT作用还受到pH的影响。提到尿素变性，要是蛋白存在分子间或分子内二硫键，即使具有高浓度的尿素或盐酸胍，而没有DTT等还原剂，那是否也不能使蛋白完全变性(断裂二硫键)。 western blot要得以进行，特别是抗体要和目的蛋白结合，一方面要使打开蛋白质的SS键，因为如果SS键不打开，很有可能抗体不能很好的识别特定的位点，就不能结合上去;另一方面还要用SDS-PAGE消除蛋白质分子内的各种非共价键，使蛋白质所带电荷和其分子量成正比，这样才能使蛋白质分离出来。

DTT在电泳中的作用

过量DTT能打开多聚体内的二硫键，使呈各个单体状态，而在loading中去除DTT后，多聚体 仍然保持原状态。因此两者对比可以分辨该蛋白是否含有多聚体形式。

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