微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异。
微生物培养基类型
按照微生物的种类分 培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。
(1)常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。
(2)常用的放线菌培养基为高氏1号培养基。
(3)常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基。
(4)常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁蔗糖(或葡萄糖,葡萄糖比较昂贵)琼脂培养基和察氏培养基等。
常见微生物培养基配方
一、糖发酵管
成分:牛肉膏 5g,蛋白胨 10g,氯化钠 3g,磷酸氢二钠 2g,0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL,蒸馏水 1000mL,PH 7.4
制法:1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。
2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶1000 mL,121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。
二、乳糖胆盐发酵管
成分:蛋白胨 20g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖 10g,0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL,蒸馏水 1000mL
制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10 mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。
注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
三、5%乳糖发酵管
成分:蛋白胨 0.2g,氯化钠 0.5g,乳糖 5g,2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL,蒸馏水 100mL,pH 7.4。
制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121 ℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。
四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
成分:磷酸氢二钾 5g,多胨 7g,葡萄糖 5g,蒸馏水 1000mL
制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL ,121℃高压灭菌15min。
甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性,甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20 mL蒸馏水。
V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试管,观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
五、营养明胶
成分:蛋白胨 5g,牛肉膏 3g,明胶 120g,蒸馏水 1000mL,pH 6.8~7.0
制法:加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固,复查最终pH应为6.8~7.0。
试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。