色谱柱目前主要应用于生物化学、药物及临床分析,具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好等特点。色谱柱发展至今已形成多种多样的专用色谱柱,比如制备柱、分析柱和各种微型柱,但色谱柱主体上仍由柱体、柱内填料和两端的接头组成。不知道大家有没有这样的体会,就是色谱柱使用一段时间后会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。
色谱柱的使用方法
加装保护柱:保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(50~100次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
过滤流动相和样品:流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别。
净化样品:样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
避免过高的柱压:避免的方法为(1)柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱最大允许压力的一半为宜。(2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。
色谱柱使用注意事项
1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此,在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
2.应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。
3.一般说来色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
4.选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
色谱柱保存方法
当色谱柱不使用的时候,就把柱二端包起来,放到盒子里室温避光保存。毛细管柱可以用废旧的隔垫裁成二块,分别插在毛细管二段。填充柱用小塑料袋套住,再用细金属丝扎起来。因为分析室有许多化学试剂,特别在橱内会有些气味,这样能较好保管色谱柱。放置时也要有序放置,毛细管柱还是用盒子装好以免压坏,在放置时在柱上和记录本上都做好记录。拆下后,两头用橡胶垫密封,橡胶垫原本色谱盒子就带有,如果没有,用进样垫制作一下就可以了,然后装在原来的色谱盒子里面,备注上相应的信息。通常要求放在干燥的地方,下次使用时,切记进样端和出口端不能装反。